細胞增殖

• MTT、CCK8法

CCK8法原理是WST-8四唑鹽（2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)- 3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium）能被活細胞內的脫氫酶還原成橙色甲臜染料，然后測定450nm下的吸光值，生成的甲臜的量與活細胞數量成正比。CCK8法可以做6天左右的生長曲線，1-6天每天收取細胞樣本檢測。也可以類似MTT法，在相同時間比較不同處理組。

• EdU法

EdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細胞增殖過程中代替胸腺嘧啶插入正在復制的DNA中。EdU與熒光染料可以特異性地反應檢測DNA的復制。

細胞克隆形成

細胞克隆形成實驗是用來檢測細胞增殖能力、侵襲性、對殺傷因素敏感性等的重要技術方法。當單個細胞在體外增殖6代以上，其后代所組成的細胞群體，成為集落或克隆。每個克隆含有50以上的細胞，大小在0.3-1.0 mm之間。集落形成率表示細胞的獨立生存能力。各種理化因素可能導致細胞的克隆形成能力發生改變。通過一定的實驗方法可以對細胞的克隆形成能力進行檢測，細胞克隆形成率即細胞接種存活率，表示接種細胞后貼壁的細胞成活并形成克隆的數量。貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆，而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞?？寺⌒纬陕史从臣毎后w依賴性和增殖能力兩個重要性狀。

細胞遷移

• Transwell檢測

細胞遷移是指細胞在接收到遷移信號或感受到某些物質的梯度后而產生的移動。細胞遷移為細胞頭部偽足的延伸、新的黏附建立、細胞體尾部收縮在時空上的交替過程。細胞遷移是正常細胞的基本功能之一，是機體正常生長發育的生理過程，也是活細胞普遍存在的一種運動形式。

Transwell的基本原理是將transwell小室放入培養板中，小室內稱為上室，培養板內稱為下室，上下層培養液以聚碳酸酯膜相隔，上室內添加上層培養液，下室內添加下層培養液。將細胞種在上室內，由于膜有通透性，下層培養液中的成分可以影響到上室內的細胞，從而可以研究下層培養液中的成分對細胞生長、運動等的影響。

細胞侵襲

• Transwell檢測

細胞侵襲是指細胞向局部侵犯，細胞侵襲實驗可用來研究細胞和胞外基質之間的相互作用。胞外基質不僅為細胞提供了結構支架，同時也包含了許多細胞生存及生長過程中生物功能因子。細胞可以分泌酶，用于降解胞外基質中特定的組分，從而使細胞可以在細胞間質中移動。胞外基質膠模仿體內細胞外基質胞外基質環境，包含了支撐細胞結構的最基本的組分。轉移性腫瘤細胞由于其高遷移和/或降解胞外基質的酶活從而表現出較強的侵襲性。

鋪有 Matrigel 膠的 Transwell 小室可用于檢測細胞侵襲能力。 Transwell的基本原理是將transwell小室放入培養板中，小室內稱為上室，培養板內稱為下室，上下層培養液以鋪有 Matrigel 膠聚碳酸酯膜相隔，Matrigel 是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質成分，含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖，鋪在無聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯濾膜上，能在DMEM培養基中重建形成膜結構，這種膜結構與天然基質膜結構極為相似。濾膜孔徑一般為8 μm，而且膜孔都被Matrigel覆蓋，細胞不能自由穿過，必須分泌水解酶，并通過變形運動才能穿過這種鋪有Martrigel的濾膜，這與體內情況較為相似。鋪有Martrigel的濾膜放在以細胞小室上下室之間，鋪有Martrigel面朝向上室，在下室中加有趨化劑，上室加入重懸的瘤細胞，具有侵襲能力的細胞在趨化劑誘導下開始穿膜運動。腫瘤細胞穿過重建基質膜的能力與它的體內侵襲轉移能力表現出較好的相關性，可以用重建基質膜模型初篩抗侵襲藥物。

細胞凋亡

• Annexin V-PI雙染色流式檢測

在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內側翻向外側。AnnexinV是一種Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，與磷脂酰絲氨酸（PS）有高度親和力，故可通過細胞外側暴露的PS與凋亡早期細胞的胞膜結合。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但對凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用，通過流式細胞儀檢測可以將處于不同凋亡時期的細胞區分開來。

細胞周期

• PI（碘化丙啶）染色

技術原理：細胞周期分為間期與分裂期兩個階段。間期又分為三期：即 DNA 合成前期 ( G1 期 )、DNA 合成期 ( S 期 ) 與 DNA 合成后期 ( G2 期 )。某些細胞在分裂結束后暫時離開細胞周期，停止細胞分裂，執行一定生物學功能 ( G0 期 )。由于細胞周期各時相的 DNA 含量不同，通常正常細胞的 G1 / G0 期具有二倍體細胞的 DNA 含量 ( 2N )，而 G2 / M 期具有四倍體細胞的 DNA 含量 (4N)，而 S 期的 DNA 含量介于二倍體和四倍體之間。PI可以與 DNA 結合，其熒光強度直接反映了細胞內 DNA含量。因此，通過流式細胞儀 PI 染色法對細胞內 DNA 含量進行檢測時，可以將細胞周期各時相區分為 G1 / G0 期，S 期和 G2 / M期，獲得的流式直方圖對應的各細胞周期可通過特殊軟件計算各時相的細胞百分率。