檢測原理：
A.寡核苷酸引物偶聯的抗體對與目的蛋白結合
將兩種抗體偶聯物：3’末端寡核苷酸和5’末端寡核苷酸，分別與兩個靶標特異性抗體偶聯。當抗體結合到分析物的兩個不同表位時，3’和5’引物會彼此接近。
B.通過DNA連接酶連接兩端引物，并通過qPCR進行擴增
只有當抗體對與蛋白結合時（A），對應的兩端引物才能與互補的夾板寡核苷酸結合，并隨后通過DNA連接酶彼此連接（B）引物。隨著DNA模板在95 °C下“融解”，連接酶滅活，抗體和其他蛋白質都會變性，僅留下100個堿基的鏈接引物，其濃度與第一階段抗體-蛋白結合的水平相應。將該鏈接引物進行40個qPCR循環的信號擴增。
檢測工作流程及數據分析：
ProQuantum免疫檢測技術的工作流程非常簡單，與諸如ELISA的傳統工作流程相比，孵育步驟更少，且無需洗滌步驟，分析檢測可在2小時內完成。
A. 目的蛋白的結合：
- 先在工作板將抗體引物、樣品等需稀釋步驟的部分完成。
- 在檢測板孔中加入5 μL體引物混合液。
- 在適當的孔中添加5 μL標準品或未知樣品，室溫孵育1小時。
B.進行qPCR
在所有檢測板的孔中添加40 ¬μL qPCR反應預混液，并將檢測板放入qPCR儀器進行連接酶反應、qPCR擴增及讀數。
以上是在整個96孔板上運行三重復的5 ¬μL樣品的示例。樣品體積最少可至2μL。
C. 實驗數據分析并提供實驗報告
基于ProQuantum™分析軟件對實驗數據進行分析，包括標準曲線的計算擬合、離群值檢測、4或5PL回歸擬合、未知樣品的結果計算（以pg/mL為單位）以及分組統計。
檢測技術優勢：
- 高靈敏度：相比傳統方法，以更高的靈敏度檢測低水平蛋白。
- 所需樣本量?。?/span>樣本使用量僅需2-5 µL。（對比其他方法如果是做重復檢測，每孔使用量至少為75 μL）。
- 工作流程簡單，操作便捷：從樣本到獲得實驗結果僅需兩個小時，無需清洗步驟，只需1小時即可完成孵育。
- 動態線性范圍廣：≥5log，盡可能避免稀釋樣本以使得結果能落在檢測范圍內。
- 無需購買昂貴的、專用的儀器：可在任何qPCR儀器上運行。
- 直觀的數據分析：可全面進行數據分析和統計組間差異。
應用方向：
- 定量檢測健康人血清中，低水平表達的細胞因子，用于早期生物標志物的檢測。
- 非常適用于獲取比較困難的樣本檢測，如鼻粘膜分泌物、眼淚、小鼠血液，檢測僅需2-5 µL樣本。
- 樣本種屬：人（有些檢測可用于非人靈長類樣本），小鼠；樣本類型：已驗證適用于血清、血漿、細胞培養上清的檢測。
當前可檢測因子：
ProQuantum免疫檢測技術是將傳統的ELISA技術與PCR檢測結合延伸出的免疫檢測手段，可輕松實現高性能靶標特異性蛋白檢測。ProQuantum檢測利用基于鄰位連接測定（Proximity Ligation Assay，PLA?）技術，為分析物提供了抗體-抗原結合特異性以及qPCR信號檢測和擴增功能，實現了高靈敏度的蛋白質表達量檢測。與傳統方法相比，ProQuantum檢測可以通過較低的樣品量檢測低水平蛋白。ProQuantum檢測流程十分簡單，僅需一個抗體孵育步驟，將孔板放入任何qPCR儀器中即可進行信號檢測，無需任何洗滌步驟。
